微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板（精選10篇）
隨著社會(huì)不斷地進(jìn)步，報(bào)告對(duì)我們來(lái)說(shuō)并不陌生，要注意報(bào)告在寫(xiě)作時(shí)具有一定的格式。我們應(yīng)當(dāng)如何寫(xiě)報(bào)告呢？以下是小編收集整理的微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板，歡迎大家借鑒與參考，希望對(duì)大家有所幫助。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
（1）了解培養(yǎng)基的配置原理和方法，掌握分離培養(yǎng)微生物的有關(guān)準(zhǔn)備工作。
�。�2）掌握高壓滅菌方法及原理
實(shí)驗(yàn)原理：
（1）培養(yǎng)基的制備原理：
培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。
從營(yíng)養(yǎng)角度分析：
營(yíng)養(yǎng)：碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)素、水分和無(wú)機(jī)鹽等；適宜的酸堿度(pH值)和一定緩沖能力；一定的氧化還原電位；合適的滲透壓。
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)，是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反復(fù)融化，其凝固性降低。
�。�2）濕熱滅菌原理——高壓蒸汽滅菌
在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。
實(shí)驗(yàn)材料與方法
配制培養(yǎng)基所需器材
實(shí)驗(yàn)設(shè)備：高壓蒸汽滅菌器。
實(shí)驗(yàn)器材：500ml三角燒瓶、藍(lán)蓋瓶、5ml刻度吸管、培養(yǎng)基、天平、砝碼、稱量紙、藥勺、500ml、100ml量筒、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐、平皿、剪刀等。
培養(yǎng)基等集中放講臺(tái)前高壓桶內(nèi)，送到洗刷室統(tǒng)一高壓滅菌條件及注意事項(xiàng)
高壓滅菌條件：121.3℃，15min。含糖培養(yǎng)基113℃，15min。
倒平板電爐加熱滅菌好的培養(yǎng)基打開(kāi)平皿包裝倒平板（10塊）
注意事項(xiàng)：空氣環(huán)境無(wú)菌（應(yīng)在酒精燈火焰周?chē)鸁o(wú)菌區(qū)）。
a.在酒精燈火焰處，傾斜打開(kāi)瓶口。
b.瓶口要過(guò)火焰。
c.左手掀開(kāi)平皿小口。
d.傾注滿皿底再多一點(diǎn)，約10ml（7cm直徑平皿）。
e.推放一邊要輕緩，不能晃起瓊脂掛壁，易在培養(yǎng)過(guò)程中污染雜菌。
f.完全凝固再翻轉(zhuǎn)平板放塑料筐內(nèi)，4℃?zhèn)溆谩?/p>
分析與討論
�。�1）如何證明培養(yǎng)基滅菌是否徹底？
把滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)的不同位置，每處抽取數(shù)管(瓶)，標(biāo)上記號(hào)，置25℃～30℃培養(yǎng)一周左右進(jìn)行檢查。如果培養(yǎng)基沒(méi)有什么變化，說(shuō)明滅菌效果良好；如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導(dǎo)致蒸汽不暢，或鍋的`結(jié)構(gòu)不合理等原因所致，應(yīng)根據(jù)上述情況進(jìn)行改進(jìn)；如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌，說(shuō)明滅菌溫度或滅菌時(shí)間不夠，應(yīng)提高壓力或延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。經(jīng)過(guò)幾次檢驗(yàn)都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的則不必進(jìn)行檢查。
經(jīng)過(guò)幾次檢驗(yàn)都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的則不必進(jìn)行檢查。
�。�2）為什么說(shuō)消毒與滅菌是微生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)必不可少的基本知識(shí)？由于病原生物廣泛存在于自然界，可通過(guò)不同途徑和媒介進(jìn)入人體，引起感染或造成疾病流行。因此，殺滅或清除存在于體外傳播媒介上的病原生物，對(duì)于切斷傳播途徑、預(yù)防和控制其感染具有重要意義。自古以來(lái)，人們就利用煮沸、火燒、日曬等方法殺滅或去除微生物，達(dá)到預(yù)防疾病的目的。實(shí)際上，除了在臨床醫(yī)療實(shí)踐中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、食物保存、飲水凈化、藥品與生物制品生產(chǎn)等過(guò)程中都需要避免微生物的污染。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 2
實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：
掌握霉菌與酵母菌的接種與培養(yǎng)方法。
實(shí)驗(yàn)原理：
接種是微生物實(shí)驗(yàn)及科學(xué)研究中一項(xiàng)基本操作技術(shù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵�，選擇合適的接種工具與接種方法，接種工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種鉤、吸管、滴管、棉簽等。常用接種方法有：斜面接種，液體接種，穿刺接種，平板接種和固體接種。接種的關(guān)鍵是無(wú)菌操作。
無(wú)菌操作的原則：在酒精燈火焰旁進(jìn)行，所有器皿均須嚴(yán)格消毒，培養(yǎng)基應(yīng)事先做無(wú)菌試驗(yàn)，接種工具使用前后須經(jīng)火焰燒灼滅菌，棉塞不能亂放，始終夾在手指中。在培養(yǎng)四大類(lèi)微生物時(shí)應(yīng)注意選擇適宜的培養(yǎng)條件。多數(shù)細(xì)菌為專(zhuān)性需氧菌與兼性需氧菌，少數(shù)為厭氧菌。多數(shù)食品腐敗菌和工業(yè)用菌種，以及人和動(dòng)物病原菌的最適生長(zhǎng)溫度為37℃，并且在近中性（PH6.5～7.5）條件下生長(zhǎng)良好。多數(shù)放線菌為好氧菌，少數(shù)為厭氧菌，最適生長(zhǎng)溫度為28～30℃，多數(shù)適宜在偏堿性環(huán)境中生長(zhǎng)（PH7.5～8.5）。
實(shí)驗(yàn)材料與方法
�。�1）實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)設(shè)備：溫箱。
實(shí)驗(yàn)器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假絲酵母、新生隱球酵母菌、細(xì)黃鏈霉菌、PDA平板、高鹽察氏平板、高氏合成I號(hào)平板、塑料筐、20%甘油水溶液、鑷子、接種鏟、無(wú)菌蓋玻片、無(wú)菌濾紙、無(wú)菌載玻片、石棉網(wǎng)、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐等。
（2）實(shí)驗(yàn)方法：平板接種：毛霉→PDA平板（點(diǎn)植法）
啤酒酵母→PDA平板（五區(qū)分離劃線法）青霉、曲霉→PDA平板（連續(xù)劃線法）
小室載玻片培養(yǎng)法：
1、取滅菌后小室平皿。
2、取無(wú)菌PDA瓊脂薄層平板，用鑷子夾住蓋玻片切割成0.5～1.0cm2的瓊脂塊，并將其移至培養(yǎng)小室中的載玻片上，制作過(guò)程注意無(wú)菌。
3、用接種環(huán)取少量霉菌的孢子接種于培養(yǎng)基四周，用無(wú)菌鑷子
將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上，并滅菌的20%甘油（用于保持濕度），蓋上皿蓋，標(biāo)記，置28～30℃培養(yǎng)3～5d
糧食產(chǎn)品的平板接種：
1.取糧食樣品20g，放入無(wú)菌燒杯，加無(wú)菌水洗滌，反復(fù)10次，棄去水后，將糧粒倒于平皿內(nèi)備用
2.鑷子取糧食種入PDA瓊脂內(nèi)，每皿可接種5-10粒。
放線菌的接種：取細(xì)黃鏈霉菌劃線法接種，在接種的劃線處，無(wú)菌操作斜插入蓋玻片數(shù)張。
注意事項(xiàng)：
1.空氣環(huán)境無(wú)菌（應(yīng)在酒精燈火焰周?chē)鸁o(wú)菌區(qū)）
2.在酒精燈火焰處，傾斜打開(kāi)瓶口。
3.接種環(huán)使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。
4.接種環(huán)使用后，先在火焰周?chē)循h(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。
5.金屬桿快速通過(guò)火焰2－3次，殺滅表面微生物
分析與討論
1、糧食中產(chǎn)毒真菌的種類(lèi)及產(chǎn)生毒素？
青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、細(xì)黃鏈霉菌（放線菌）青霉素、絲生毛霉素、黃曲霉素、根霉素、白念菌素。細(xì)黃鏈菌素
2、常用霉菌培養(yǎng)基有哪些？
馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基
豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）瓊脂培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基
3、霉菌的.接種方法有何不同？為什么？
（1）連續(xù)劃線法（青霉、曲霉）
青霉與曲霉為局限性生長(zhǎng)的霉菌。應(yīng)采用連續(xù)劃線接種法接種。
�。�2）點(diǎn)植法（根霉、毛霉）
根霉與毛霉生長(zhǎng)區(qū)域比較大，應(yīng)采用點(diǎn)植法。
�。�3）小室載玻片培養(yǎng)法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）
實(shí)驗(yàn)三霉菌的制片與形態(tài)觀察
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；
了解四類(lèi)常見(jiàn)霉菌的基本形態(tài)特征。了解放線菌的基本形態(tài)特征。
實(shí)驗(yàn)原理：霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多（約為3-10μm），常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。霉菌菌絲較粗大，細(xì)胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，用此染液做霉菌制片的特點(diǎn)是細(xì)胞不變形，具有殺菌、防腐作用，不易干燥，能保持較長(zhǎng)時(shí)間，能防止孢子四處飛散，棉蘭具有一定的染色作用，染液的藍(lán)色能增大反差。
實(shí)驗(yàn)材料：
�。ㄒ唬┚N：在馬鈴薯瓊脂平板上培養(yǎng)3—4天的青霉(Penicilliumsp.)、曲霉(Aspergillussp.)、毛霉（Mucorsp.）、根霉；
�。ǘ┢鞑募坝镁撸鸿囎�、載玻片、蓋玻片、顯微鏡。
實(shí)驗(yàn)方法：
�。ㄒ唬┲苯又破^察
于潔凈載玻片上，用鑷子取霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲，然后小心地蓋上蓋玻片。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時(shí)再換高倍鏡
�。ǘ┬∈遗囵B(yǎng)觀察
將載玻片直接放低倍鏡下觀察，再換高倍鏡觀察。
觀察原則：
毛霉：用低倍鏡觀察孢子囊梗、囊軸等。用高倍鏡觀察孢子囊孢子的形狀、大小。
根霉：菌絲、孢子同毛霉，注意觀察有無(wú)假根。
曲霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無(wú)隔膜，分生孢子著生位置，辨認(rèn)分生孢
子梗、頂囊、小梗和分生孢子。
青霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無(wú)隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生孢子的形狀等。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
分析與討論：
青霉和曲霉的形態(tài)有哪些異同？
青霉常分布在霉腐變質(zhì)的水果、蔬菜、糧食和皮革等物體上，菌體直立菌絲的頂端長(zhǎng)有掃帚狀的結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)的每一個(gè)分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青綠色，進(jìn)行孢子生殖。
曲霉廣泛分布在谷物、空氣和土壤中，曲霉直立菌絲的頂端膨大成球狀，球狀結(jié)構(gòu)的表面放射狀地生有成串的孢子，孢子隨曲霉種類(lèi)的不同而呈黃色、橙色或黑色。
從皮膚取材查真菌如何檢查？
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 3
實(shí)驗(yàn)名稱：
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
二、實(shí)驗(yàn)原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀，在不同的光照條件下，葉綠體可以運(yùn)動(dòng)，改變橢球體的方向，這樣既能接受較多的光照，又不至于被強(qiáng)光灼傷。在強(qiáng)光下，葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源；在弱光下，葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。
因此，在不同光照條件下采集的葫蘆蘚，其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣�；罴�(xì)胞中的.細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的.葉綠體的運(yùn)動(dòng)做為標(biāo)志。
三、材料用具
蘚類(lèi)的葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，鉛筆
四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程（見(jiàn)書(shū)Ｐ30）
1．制作蘚類(lèi)葉片的臨時(shí)裝片
2．用顯微鏡觀察葉綠體
3．制作黑藻葉片臨時(shí)裝片
4．用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
物理實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ·化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ·生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ·實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式 ·實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板
五、討論
1．細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動(dòng)，為什么？
2．葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系？
3．植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，這對(duì)于活細(xì)胞完成生命活動(dòng)有什么意義？
4．用鉛筆畫(huà)一個(gè)葉片細(xì)胞，標(biāo)出葉綠體的大致流動(dòng)方向。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 4
實(shí)驗(yàn)名稱：
觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)習(xí)制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本。
2、學(xué)會(huì)使用顯微鏡觀察洋蔥表皮，用圖畫(huà)記錄觀察到的洋蔥表皮細(xì)胞。
3、對(duì)比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。
實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)：
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)：
正確使用顯微鏡。
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
分組實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、導(dǎo)入課題
出示洋蔥。問(wèn)：如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊，用顯微鏡來(lái)觀察能看到些什么呢？（板書(shū)課題）
二、制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本
1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本的方法與步驟。
�。�1）在一個(gè)干凈的玻璃載片中間滴一滴清水；
�。�2）用小刀在洋蔥鱗葉片內(nèi)壁劃一個(gè)“井”字，用鑷子取下“井”中洋蔥內(nèi)表皮放到載玻片的水滴中央，注意標(biāo)本要平展開(kāi)，不能折疊；
�。�3）用蓋玻片傾斜著蓋到標(biāo)本上面，放蓋玻片時(shí)，先放一端，再慢慢放下另一端，注意不要有氣泡。如水不足，可沿蓋玻片邊緣滴加；若水分過(guò)多，可用吸水紙吸掉；
（4）從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒，并把玻片微微傾斜，再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水；
�。�5）洋蔥表皮玻片標(biāo)本做成可進(jìn)行觀察。
2、學(xué)生以組為單位自制玻片標(biāo)本（最好制三份裝片，便于下面的對(duì)比觀察），教師巡視指導(dǎo)（教育學(xué)生注意安全）。
三、觀察洋蔥表皮細(xì)胞
1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的`內(nèi)容畫(huà)在科學(xué)記錄本上。
2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫(huà)到科學(xué)記錄本上。
3、學(xué)生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么？它們有何不同？
4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
�。�1）出示顯微鏡，引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識(shí)顯微鏡，簡(jiǎn)介各部分的名稱、功能及使用方法，學(xué)生每5人一組操作熟悉顯微鏡。
�。�2）各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
�。�3）學(xué)生觀察、記錄、描畫(huà)洋蔥表皮細(xì)胞。教師巡視指導(dǎo)，各組的實(shí)驗(yàn)組長(zhǎng)監(jiān)督組員操作是否規(guī)范，要求每個(gè)人都要操作、都要觀察，并將觀察結(jié)果進(jìn)行交流。組長(zhǎng)將大家在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫(huà)到科學(xué)記錄本上。
5、全班交流在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)。
�。�1）各組推薦發(fā)言代表談自己的.發(fā)現(xiàn)。
（2）各組將所畫(huà)的觀察結(jié)果向全班展示。
（3）交流討論評(píng)價(jià)。
6、師小結(jié)：我們發(fā)現(xiàn)放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的細(xì)節(jié)更多，更清楚。我們發(fā)現(xiàn)洋蔥表皮是由一個(gè)個(gè)比較規(guī)則的多邊形組成的，而且大多呈長(zhǎng)方形，外為細(xì)胞壁，內(nèi)為無(wú)色細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。洋蔥表皮上的一個(gè)個(gè)小房間似的結(jié)構(gòu)，就是洋蔥的細(xì)胞。（師一邊描述一邊畫(huà)洋蔥細(xì)胞簡(jiǎn)圖）
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
回收實(shí)驗(yàn)器材，整理實(shí)驗(yàn)桌。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 5
一、實(shí)驗(yàn)名稱：
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)材料：
顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片，及其他細(xì)胞裝片。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座，把顯微鏡向著光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。
2、對(duì)光：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔。
3、調(diào)節(jié)載物臺(tái)下的反光鏡，從目鏡往下看，能看見(jiàn)亮的光圈。
4、觀察：調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺(tái)上，用壓片夾夾住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中央。
5、左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋等，直到看清切片上的細(xì)胞為止，最后整理器材。
四、使用注意事項(xiàng)：
1、取送顯微鏡時(shí)，應(yīng)右手握住鏡臂，左手托住鏡座，輕拿輕放。
2、鏡檢時(shí)，坐姿端正，一般用左眼觀察物象，用右眼看著實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙畫(huà)圖。兩眼須同時(shí)睜開(kāi)。
3、切忌一面從目鏡進(jìn)行觀察，一面使鏡筒下降，這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。
4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時(shí)，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。
5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒，移開(kāi)鏡頭后再取出玻片標(biāo)本，以免取玻片時(shí)擦損鏡頭的鏡面。
五、實(shí)驗(yàn)原理：
利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
六、創(chuàng)新點(diǎn)：
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片，以供學(xué)生操作、觀察，增加了學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的.焦距的過(guò)程，從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 6
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，我們希望深入了解微生物的基本特性，掌握微生物的分離、培養(yǎng)與觀察方法，為進(jìn)一步研究微生物的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
微生物是一類(lèi)個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的生物，包括細(xì)菌、真菌、病毒等。本實(shí)驗(yàn)主要利用微生物的繁殖特性，通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，將微生物分離出來(lái)并進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)顯微鏡觀察，我們可以了解微生物的形態(tài)、大小、染色反應(yīng)等特性。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：選擇合適的培養(yǎng)基，如肉湯培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基等；準(zhǔn)備顯微鏡、接種環(huán)、滅菌鍋等實(shí)驗(yàn)器材。
滅菌處理：將培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，以消除雜菌干擾。
微生物分離：從樣本中提取微生物，采用稀釋法或劃線法將微生物接種到培養(yǎng)基上。
培養(yǎng)與觀察：將接種后的培養(yǎng)基放置在恒溫箱中，在適宜的溫度和濕度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。定期觀察微生物的生長(zhǎng)情況，記錄生長(zhǎng)特點(diǎn)。
顯微鏡觀察：選擇生長(zhǎng)良好的菌落，用接種環(huán)取少量菌體，置于顯微鏡下觀察其形態(tài)、大小及染色反應(yīng)等特性。
數(shù)據(jù)記錄與整理：詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括微生物的形態(tài)特征、生長(zhǎng)情況等。整理數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，我們成功分離并培養(yǎng)了多種微生物，包括細(xì)菌、真菌等。通過(guò)顯微鏡觀察，我們記錄了各種微生物的形態(tài)特征，并對(duì)其進(jìn)行了初步分類(lèi)。以下是部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)表格和圖表記錄。
五、結(jié)論
通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，我們掌握了微生物的'分離、培養(yǎng)與觀察方法，了解了不同微生物的形態(tài)特征和生長(zhǎng)特性。這些知識(shí)對(duì)于進(jìn)一步研究微生物的應(yīng)用具有重要意義。在未來(lái)的研究中，我們可以利用這些知識(shí)探索微生物在生物工程、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)也提高了我們的實(shí)踐操作能力和科學(xué)探究精神。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 7
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)會(huì)如何使用顯微鏡觀察細(xì)胞；
2、了解細(xì)胞的結(jié)構(gòu)；
3、學(xué)會(huì)制作臨時(shí)裝片。
二、實(shí)驗(yàn)材料：
�。▽�(shí)驗(yàn)材料可換）松針、動(dòng)物血液、動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片
三、實(shí)驗(yàn)用具：
載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡（物鏡5X、10X、40X）
四、方法步驟：
1、制作松針的臨時(shí)切片：
�。�1）取干凈的載玻片一個(gè)平置于試驗(yàn)臺(tái)上，用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。
�。�2）將土豆切成條狀（截面約：0.5X0.5cm)取兩條，將一根松針夾在兩個(gè)土豆條之間，用刀片削成盡量薄的薄片，削時(shí)，手腕不動(dòng)，靠大臂帶動(dòng)小臂移動(dòng)刀片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片，置于載玻片的水滴上。
�。�3）從一側(cè)輕輕蓋上蓋玻片，不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周?chē)乃危赐瓿膳R時(shí)切片的制作。
2、觀察切片：
�。�1）取出顯微鏡，置于試驗(yàn)臺(tái)上靠左的位置，打開(kāi)光源。
�。�2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺(tái)上，調(diào)整載物臺(tái)位置，使蓋玻片對(duì)準(zhǔn)光源。
（3）使用5X物鏡觀察切片，使松針切片在視野中心，換成10X物鏡，觀察松針葉面橫切結(jié)構(gòu)。
�。�4）換成40X物鏡觀察，注意細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu)，畫(huà)圖。
3、動(dòng)物血液臨時(shí)裝片的制作及觀察（除了不用切片，其他類(lèi)似）
4、 動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片的觀察。
五、反思：
1、松針的葉面結(jié)構(gòu)是什么樣的？
2、動(dòng)物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)是什么樣的？與植物細(xì)胞又什么不同？
3、顯微鏡的'物鏡倍數(shù)愈大，視野的亮度如何？物體的大小如何？
4、如何調(diào)節(jié)焦距？
5、如何才能使切片盡量的�。壳衅暮癖�(duì)顯微鏡下觀察的效果有什么影響。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 8
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、掌握顯示細(xì)胞中過(guò)氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。
2、了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法
二、實(shí)驗(yàn)原理：
1、細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化物酶能把許多胺類(lèi)氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來(lái)判定過(guò)氧化物酶的有無(wú)或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的，無(wú)需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過(guò)程。它是一個(gè)主動(dòng)的.、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過(guò)程。
3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮；細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周?chē)?邊緣化)；細(xì)胞膜有小泡狀形成；晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體；根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀察是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
細(xì)胞中過(guò)氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液；
2、取骨髓細(xì)胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開(kāi)股骨一端，用牙簽尖的一端插入剪開(kāi)的'小孔中，摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有PBS的載片上；
3、涂片：用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個(gè)方向涂布推開(kāi)，室溫晾干；
4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒-1分鐘。
5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘（以蓋滿涂片為宜）
6、清水沖洗，番紅復(fù)染2min。
7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100×）
細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)與觀察吉姆薩染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。
吖啶橙染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min
4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
6、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結(jié)果與分析：
1、根據(jù)隨機(jī)選擇的幾個(gè)視野的統(tǒng)計(jì)，該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9
2、Hela細(xì)胞凋亡過(guò)程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化（吖啶橙染色）
五、思考題：
1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制
細(xì)胞凋亡是一個(gè)受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動(dòng)自殺過(guò)程，其觸發(fā)因素多種多樣，包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控。
2、細(xì)胞凋亡的特征
凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮；細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周?chē)?邊緣化)；細(xì)胞膜有小泡狀形成；晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細(xì)胞凋亡的方法
定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場(chǎng)倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）
定量或半定量的研究方法：各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 9
一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/strong>
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。
2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進(jìn)行DNA的分離純化的實(shí)驗(yàn)原理。
3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。
二、【實(shí)驗(yàn)原理】
1、質(zhì)粒DNA的制備方法
質(zhì)粒（Plasmid）是獨(dú)立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子，分布于細(xì)菌、放線菌、真菌以及一些動(dòng)植物細(xì)胞中，但在細(xì)菌細(xì)胞中含量最多。細(xì)菌質(zhì)粒大小介于1～200Kb之間，是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類(lèi)群，在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)它們利用宿主細(xì)胞的復(fù)制機(jī)構(gòu)合成質(zhì)粒自身的DNA。
質(zhì)粒DNA的制備包括3個(gè)步驟：
�、倥囵B(yǎng)細(xì)菌，使質(zhì)粒DNA大量擴(kuò)增；
�、谑占土呀饧�(xì)菌
③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括：堿裂解法：0.2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，一般用于質(zhì)粒大量提取。在實(shí)際操作中可以根據(jù)宿主菌株類(lèi)型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)以及質(zhì)粒DNA的用途進(jìn)行選擇。本實(shí)驗(yàn)選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。
2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法
在細(xì)菌細(xì)胞中，染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來(lái)，但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達(dá)12.0的堿性溶液中，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性；共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈不完全分離。因?yàn)樗鼈冊(cè)谕負(fù)鋵W(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用pH值4.6的KAc（NaAc）高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來(lái)的共價(jià)閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中；但染色體DNA不能復(fù)性，而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見(jiàn)的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過(guò)離心，與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA，可用無(wú)水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類(lèi)似，乙醇沉淀DNA的同時(shí)，也伴隨著RNA沉淀，可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通過(guò)酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。
3、凝膠電泳進(jìn)行DNA分離純化
電泳（electrophoresis）是帶電物質(zhì)在電場(chǎng)中向著與其電荷相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場(chǎng)中會(huì)向相反的電極移動(dòng)。凝膠是支持電泳介質(zhì)，它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場(chǎng)中，其中的'電離子會(huì)發(fā)生移動(dòng)，移動(dòng)的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動(dòng)速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段，是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。
凝膠電泳技術(shù)操作簡(jiǎn)單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測(cè)到。需要的話，這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實(shí)驗(yàn)。
分子生物學(xué)中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構(gòu)型和方位進(jìn)行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高，長(zhǎng)度上相差1bp或質(zhì)量上相差0.1%的DNA都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行DNA序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進(jìn)行電泳，并能容納較大的DNA上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長(zhǎng)鏈狀多聚物，由β—D—吡喃半乳糖與3，6—脫水—L—吡喃半乳糖組成，相對(duì)分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點(diǎn)為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬(wàn)bp），小片段DNA（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場(chǎng)中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測(cè)定DNA的相對(duì)分子質(zhì)量，分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段，進(jìn)一步純化DNA等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個(gè)因素：樣品DNA分子的大小、DNA分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場(chǎng)、緩沖液和溫度。
三、【實(shí)驗(yàn)材料】
1、實(shí)驗(yàn)儀器
培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1.5ml塑料離心管（Eppendorf管）、高速離心機(jī)、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號(hào)槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號(hào)筆、手套等。
2、實(shí)驗(yàn)試劑
LB培養(yǎng)基，抗生素Ap（氨芐青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（PCI）混合液，預(yù)冷無(wú)水乙醇，TAE電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（EB），DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5.2的醋酸鈉。
四、【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)
配制LB液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配LB固體培養(yǎng)基；準(zhǔn)備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1.5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個(gè) ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。
2、菌體培養(yǎng)
在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落，接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行37℃振蕩過(guò)夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加Ap100ul
�。�100ug/ml），質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因，使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長(zhǎng)。 過(guò)夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質(zhì)較多，然后用移液槍吸取過(guò)夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mlLB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入Ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期，生長(zhǎng)速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質(zhì)少，適合提取質(zhì)粒。
3、質(zhì)粒提取
�。�1）稱量空的50ml離心管的重量為14.331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細(xì)胞。
�。�2）向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14.437g，則菌體質(zhì)量為106mg。
�。�3）洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液Ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液Ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會(huì)快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細(xì)胞提前破裂，防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價(jià)金屬離子的螯合劑，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生長(zhǎng)。Tris—Cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒H。
�。�4） 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml（與溶液Ⅰ對(duì)應(yīng)），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細(xì)胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細(xì)胞溶解。同時(shí)，強(qiáng)堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性；SDS為下一步沉淀做鋪墊。
�。�5）按比例加入冰預(yù)冷的溶液Ⅲ1.5ml（與溶液Ⅰ、Ⅱ?qū)?yīng)），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物、細(xì)胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間的堿性條件會(huì)打斷基因組DNA，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被PDS共沉淀。同時(shí)變性的質(zhì)粒DNA復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進(jìn)一步加速了沉淀。
�。�6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側(cè)，用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻，加入2倍體積的冰無(wú)水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng)，對(duì)DNA很安全，因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時(shí)，乙醇會(huì)奪去DNA周?chē)乃肿樱笵NA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。
�。�7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。
�。�8）以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標(biāo)記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色，隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o(wú)色。所以為了完全溶解質(zhì)粒，要在離心管上標(biāo)記質(zhì)粒所在位置。
�。�9）將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個(gè)Eppendorf管中。TE是pH緩沖液，為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護(hù)堿基對(duì)。同時(shí)含有EDTA是二價(jià)陽(yáng)離子的螯合劑，抑制DNA酶作用。
4、質(zhì)粒純化
�。�1）Eppendorf管中加入RNase A（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0.5—1h
（2）將上述的溶液平均分配到2個(gè)1.5ml的微量離心管中，每管0.5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）Tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的，顯黃色。苯酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無(wú)色，在中間產(chǎn)生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質(zhì)。
（3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強(qiáng)的蛋白變性劑，但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會(huì)影響DNA的酶切，它本身易被氧化，會(huì)損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質(zhì)粒中的脂類(lèi)，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的泡沫，有利于分層更明顯。此時(shí)溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質(zhì)的存在。
（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中，得上清液400ul。
�。�5）向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻，再加入2倍體積的冰無(wú)水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。
（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到DNA沉淀，為白色。
�。�7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。
（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。
5、質(zhì)粒檢測(cè)
�。�1）稱取0.4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標(biāo)好液面位置，加入40ml的1×TAE電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補(bǔ)充在溶膠過(guò)程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。
�。�2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進(jìn)電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液，至液面覆蓋過(guò)膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。
�。�3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍(lán)色）的移動(dòng)。
�。�4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進(jìn)EB溶液中進(jìn)行染色，完全浸泡約5min。
�。�5）凝膠成像儀觀察。
五、【注意事項(xiàng)】
�。�1）滴加溶液II時(shí)，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動(dòng)作要快，因?yàn)閺?qiáng)堿在溶液中停留時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)破壞質(zhì)粒DNA。
�。�2）加入溶液III后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液III中和強(qiáng)堿使質(zhì)粒復(fù)性，不可劇烈震蕩， 防止染色體DNA斷裂，應(yīng)該上下顛倒離心管，使其混勻。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 10
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
（一）掌握一般培養(yǎng)基的制備原理及要求，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測(cè)定，熟悉一般培養(yǎng)基的制備過(guò)程和各種器皿滅菌方法。
�。ǘ┱莆占�(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法，掌握細(xì)菌抹片的制備方法和革蘭氏染色法及油鏡的使用方法，并認(rèn)識(shí)革蘭氏染色的反應(yīng)特性。
（三）掌握學(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一般方法及步驟。
二、實(shí)驗(yàn)用品
（一）器材
量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號(hào)筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡
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肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結(jié)晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內(nèi)臟
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）培養(yǎng)基的制備
1、麥康凱培養(yǎng)基
（1）組成：蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖10g、0.01%結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml
�。�2）方法：將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中，并加入乳糖，加熱熔化。將兩液混合，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。
注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。
2、血清平板
�。�1）組成：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、牛血清
�。�2）方法：將滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至45~50℃時(shí)，加入牛血清，并混勻，傾注平板。
注：不得將牛血清一并加入后再滅菌。
3、lb培養(yǎng)基
�。�1）組成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g
（2）方法：在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，調(diào)節(jié)ph至7.4，加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，傾注平板。
4、液體培養(yǎng)基（在lb培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）
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在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在，未發(fā)現(xiàn)，則立即用消毒的器械對(duì)其進(jìn)行生理解剖，觀察其病理特征現(xiàn)象，取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物，并注意組織的完整性，用儲(chǔ)物袋密封保存。
�。ㄈ┘�(xì)菌粗培養(yǎng)
1、消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
2、接種
�。�1）在無(wú)菌操作臺(tái)酒精燈旁打開(kāi)用儲(chǔ)物袋密封保存的病料，先左手持鑷子右手持剪刀，把病料剪出一個(gè)小口。
�。�2）右手持滅過(guò)菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開(kāi)約20左右，然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)一下后，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板上。
�。�3）用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)記，并將平板倒放。
以此方法，分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上，各接種2個(gè)血清平板。
3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。注：劃線接種時(shí)盡量劃開(kāi)，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落，且劃線時(shí)接種環(huán)應(yīng)盡量?jī)A斜，以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無(wú)菌操作臺(tái)窗口，打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。
（四）細(xì)菌純培養(yǎng)
1、菌落特征判斷
待粗培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)24小時(shí)后，取出用放大鏡觀察記錄單個(gè)小菌落的形態(tài)特征并用實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙記錄好，并在平板底部上做好觀察標(biāo)記，其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu)造、隆起度、濕潤(rùn)度、透明度、顏色等。
2、取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢
（1）取干凈的載玻片，用記號(hào)筆在其一面做好正反面標(biāo)記，再在載玻片另一面中央滴上一小滴蒸餾水。
�。�2）將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，在酒精燈旁從標(biāo)記的單個(gè)小菌落中取少許細(xì)菌置于蒸餾水中混勻（同時(shí)蓋好平板倒扣置于一旁），用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜，再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過(guò)固定好細(xì)菌，待冷卻進(jìn)行染色。
�。�3）先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液染色1~2min，再水洗；隨后滴加95%的酒精脫色30~60s，再水洗；最后滴加稀釋的品紅進(jìn)行復(fù)染30~60s，再水洗；待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。
�。�4）將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下，滴加一滴松柏油進(jìn)行鏡檢，觀察其形態(tài)特征，判斷細(xì)菌的種屬。
3、細(xì)菌接種培養(yǎng)
�。�1）消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
�。�2）接種：右手持滅過(guò)菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開(kāi)約20左右，然后將接種環(huán)插入揭開(kāi)的平板口內(nèi)蘸去一下鏡檢標(biāo)記的小菌落，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標(biāo)記，將平板倒放。
�。�3）將接種好的'平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。
注：油鏡用完后應(yīng)立即清理物鏡上的松柏油；劃線接種時(shí)盡量劃開(kāi)，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落；待接種完畢后熄滅無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無(wú)菌操作臺(tái)窗口，打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。
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1、鏡檢：用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢，觀察并記錄是否為純培養(yǎng)的細(xì)菌。
2、分裝液體培養(yǎng)基：先對(duì)無(wú)菌操作臺(tái)及需要使用的器械進(jìn)行消毒滅菌，然后用鉗子揭開(kāi)一個(gè)空試劑瓶，用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養(yǎng)基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶?jī)?nèi)，并立即蓋上液體培養(yǎng)基大試劑瓶瓶塞。
3、接種：右手持接種環(huán)，用火焰對(duì)其進(jìn)行滅菌，待冷卻后，取出純培養(yǎng)的平板，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈旁，蘸去少許細(xì)菌，左手傾斜液體培養(yǎng)基，將接種環(huán)，伸入液體培養(yǎng)基內(nèi)攪動(dòng)，然后取出對(duì)接種火焰環(huán)滅菌，并用滅菌的包裝紙捆綁好后，用記號(hào)筆做好相應(yīng)標(biāo)記，置于一旁。
4、培養(yǎng)搖菌：將接種好的液體培養(yǎng)基置于水浴培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。注：分裝一個(gè)培養(yǎng)基就接種一個(gè)培養(yǎng)基，不得全部分裝完后再一個(gè)一個(gè)接種。
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1、保定：選擇健康的青壯年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋轉(zhuǎn)數(shù)周讓其眩暈，然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚，并翻轉(zhuǎn)左手，使其頭部朝下，以達(dá)到內(nèi)臟前移的目的。
2、接種：先用酒精棉球蘸取酒精對(duì)注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、觀察：將接種的小白鼠放在適宜的環(huán)境下生活，并在鼠籠處用記號(hào)筆標(biāo)記好接種時(shí)間、菌種等。
4、再培養(yǎng)鑒定：待小白鼠死亡后，對(duì)其進(jìn)行解剖，觀察其內(nèi)臟病變情況，并取肝臟直接涂在相應(yīng)培養(yǎng)基上，在適宜條件下反向培養(yǎng)24小時(shí)后，取菌落細(xì)菌進(jìn)行鏡檢觀察判斷。
注：在注射小白鼠2小時(shí)候需要觀察小白鼠是否因注射時(shí)傷害到內(nèi)臟而死亡。
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