動物實驗方案設(shè)計

　　動物實驗指在實驗室內(nèi)，為了獲得有關(guān)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等方面的新知識或解決具體問題而使用動物 進行的科學(xué)研究。以下小編為你整理了動物實驗方案設(shè)計，希望對你有所參考幫助。

　　一、實驗設(shè)計的基本要素和原則

　　實驗設(shè)計就是擬定實驗方案，在進行科學(xué)研究時，對研究方案作合理的安排，以減少隨機誤差的影響。采用適當(dāng)?shù)难芯繉嶒灤螖?shù)，減少實驗的成本并能對數(shù)據(jù)進行有效的分析，提高實驗研究的可靠性，從而實現(xiàn)研究的目的。

　　研究設(shè)計包括專業(yè)設(shè)計與統(tǒng)計設(shè)計兩個部分。統(tǒng)計設(shè)計主要是依據(jù)研究目的，從研究的現(xiàn)況條件出發(fā)，規(guī)定研究因素、選擇效應(yīng)指標(biāo)、確定研究對象的引入方式方法和規(guī)模，擬實施的方法、方案，及數(shù)據(jù)收集、整理分析的模式，直至結(jié)果的解釋，進行系統(tǒng)的安排，使其消耗最少的人力物力和時間，而獲得可靠的信息與結(jié)論。

　　1．實驗設(shè)計的基本要素

　　實驗設(shè)計的基本要素為：實驗單位、處理因素和實驗效應(yīng)。

　　(1)大多數(shù)情況下，實驗單位等同于實驗對象、受試對象，在動物實驗中的動物即為實驗單位。

　　(2)處理要素：是研究者根據(jù)研究目的施加于實驗單位，在實驗中需要觀察并闡明其效應(yīng)的因素，是實驗單位分組的標(biāo)志。而非處理因素則是指實驗中非人為施加的、與處理因素同時存在，同樣可以使受試對象產(chǎn)生實驗效應(yīng)的因素，如實驗動物的雌雄、體重等因素。突出研究因素的主導(dǎo)作用，排除混雜因素的干擾作用，可以通過相應(yīng)的實驗設(shè)計方法，盡量使非處理因素在各處理組中的分布達(dá)到一致或均衡，以便分離出處理因素的效應(yīng)。另外，處理因素的施加方法、強度、頻率和持續(xù)時間等，在整個實驗中應(yīng)始終保持不變，以保證實驗結(jié)果評價的可靠性和穩(wěn)定性；處理因素作用于受試對象的反應(yīng)，是研究結(jié)果的最終體現(xiàn)，其基本要求客觀性、特異性、靈敏性和精確性。

　　(3)實驗效應(yīng)：處理因素作用于實驗動物后，出現(xiàn)實驗效應(yīng)，一般是用各種指標(biāo)來反映的。指標(biāo)按其性質(zhì)可分為計數(shù)(含等級)指標(biāo)和計量指標(biāo)，計數(shù)指標(biāo)如“是”“否”“有”“無”，“陽性”“陰性”，“痊愈”“顯效”“好轉(zhuǎn)”“無效”，“存活”“死亡”等。計量指標(biāo)指可測量(含間接測量)的指標(biāo)，如很多檢查和檢驗指標(biāo)。

　　在對指標(biāo)進行觀察時應(yīng)注意：

　�、賹嶒炐�應(yīng)的觀察應(yīng)避免偏性。研究者的心理往往偏于陽性結(jié)果，為了消除或減少測量偏差，設(shè)計時常采用盲法。

　�、趹�(yīng)注意處理和效應(yīng)的關(guān)系：處理與效應(yīng)之間存在一定的關(guān)系，如劑量反應(yīng)曲線。做實驗應(yīng)選擇一個合適的實驗劑量。

　　2．實驗設(shè)計的基本原則

　　實驗設(shè)計的三大原則即為重復(fù)(replication)、隨機化(randomization)和對照(control)，這是藥理實驗設(shè)計的基本要求。其目的是排除非處理因素的作用，控制隨機誤差，避免系統(tǒng)誤差，提高實驗效率。

　　(1)重復(fù)原則(重復(fù)穩(wěn)定性)：能夠充分重現(xiàn)的實驗，才能稱為可靠的實驗。另外，實驗研究應(yīng)有一定數(shù)量的重復(fù)觀測結(jié)果，即實驗單位要達(dá)到一定數(shù)量。避免將個別情況誤認(rèn)為普遍情況，將偶然誤認(rèn)為必然，將實驗結(jié)果錯誤推廣，同一實驗條件下、同一觀測指標(biāo)的多次測量會有變異，多次測量才能描述變異，估計隨機誤差。實驗單位足夠多時，才能獲得隨機誤差比較小的統(tǒng)計量。重復(fù)的目的是估計和控制實驗中的隨機誤差，提高實驗結(jié)果的可靠性。樣本中包含的實驗單位數(shù)稱為樣本含量(樣本量)。重復(fù)原則的應(yīng)用就是樣本含量的估計。

　　首先要考慮實驗要有足夠的例數(shù)，能準(zhǔn)確重復(fù)再現(xiàn)，同時盡可能排除對實驗的干擾，它包括：①動物方面，如品種、品系、體重、年齡、性別、飼料及飼養(yǎng)環(huán)境等；②儀器方面：準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、電壓穩(wěn)定性及操作熟練程度等；③藥物方面：性能、批號、純度、劑量和注射速度等。此外還有室溫、氣壓、季節(jié)等物理因素，甚至實驗是在上午還是下午，動物群養(yǎng)或單養(yǎng)等，均應(yīng)預(yù)先考慮清楚，做好設(shè)計。

　　(2)隨機化原則：其目的是一切干擾因素分配到各組時只受純機遇的抽樣誤差的影響，避免受實驗者主觀因素的干擾，減小或避免偏性誤差，是實驗設(shè)計中的重要原則之一。隨機化手段可采取隨機數(shù)字表或小計算機上的隨機數(shù)字鍵。

　　在實驗分組時，每個受試對象均有相同的概率或機會被分配到實驗組和對照組。隨機化是一種實驗設(shè)計的分組程序，而非“隨便”、“隨意”和“非選擇性”。隨機化的意義是保證各種非處理因素在各個實驗組和對照組達(dá)到均衡，從而顯現(xiàn)處理因素的作用，避免各種主、客觀因素可能導(dǎo)致的偏性，減少系統(tǒng)誤差，提高研究結(jié)果的效度。隨機化分組是從假設(shè)檢驗結(jié)果推論因果關(guān)系的基礎(chǔ)，確定處理因素與實驗結(jié)果之間因果關(guān)系的前提是隨機分組后、施加干預(yù)前，所有觀察對象都屬于同一個總體。

　　(3)對照原則：確定實驗組時，同時設(shè)立對照組，即不施加處理因素的實驗組，只暴露于非處理因素。對照組除沒有處理因素外，其他對實驗結(jié)果可能有影響的因素(已知、可控的非處理因素)都應(yīng)該與實驗組盡量相同。

　　常用的對照形式，分為空白對照(blank control)、實驗對照(experimental control)、標(biāo)準(zhǔn)對照(standard control)、相互對照(mutual control)、潛在對照(potential control)�？瞻讓φ占磳�對照組不施加干預(yù)，對照組的處理因素為“空白”；實驗對照即對照組不施加干預(yù)，但施加某種與處理因素有關(guān)的實驗因素，用于處理因素的施加需伴隨其他因素，而這些因素又可能影響實驗結(jié)果時；標(biāo)準(zhǔn)對照組的干預(yù)采用現(xiàn)有“標(biāo)準(zhǔn)”方法或常規(guī)方法，主要用于臨床試驗，當(dāng)倫理上不允許對對照組患者采用空白對照或假干預(yù)，如新藥研究采用目前療效確定的藥物作為對照藥；相互對照則不專門設(shè)立對照組，各實驗組間互為對照，如比較幾種同類藥物的療效差別：潛在對照也不用專門設(shè)立對照組，以過去的研究結(jié)果為對照(歷史對照)。另外，當(dāng)實驗組和對照組例數(shù)相等時，統(tǒng)計學(xué)證明其統(tǒng)計效率最高，輕視對照或?qū)φ蛰^少是錯誤的和不妥當(dāng)?shù)摹?/p>

　　二、抽樣和分組

　　抽樣和分組必須嚴(yán)格遵守隨機原則，主要因素要均衡一致，但抽取哪一只動物。分配到哪一組則按隨機數(shù)字表或鍵而定。如果隨意拿取動物，先取到的為第一組，依次遞推，則反應(yīng)活潑敏捷不易抓到的動物勢必集中到最后幾組，各組的條件就有了偏性誤差。為此，下面介紹幾種主要的分組實驗設(shè)計方法。

　　1．完全隨機設(shè)計

　　完全隨機設(shè)計(completely random design)亦稱單因素設(shè)計，即將受試對象隨機分到各處理組中進行試驗觀察，或分別從不同總體中隨機抽樣進行對比觀察。它適用于兩個或兩個以上樣本的比較，各組間樣本量可相等，也可不相等，但是樣本相等時統(tǒng)計分析效率較高。

　　例1．將12只動物隨機分配到A、B兩組。

　　(1)先將12只動物編號為1、2……12號，然后在隨機數(shù)字表內(nèi)任意確定一個起始點和方向連續(xù)取12個隨機數(shù)字，并依次抄錄于動物編號下。

　　(2)本例從隨機數(shù)字表第6行第19、20列起向下讀取12個隨機數(shù)字，取兩位隨機數(shù)字(表4-1)。

　　(3)將隨機數(shù)字從小到大順序排列后得序號R，并規(guī)定R=1～6者為A組，R：7～12者為B組。

　　表4-1  12只動物完全隨機分兩組結(jié)果（采用隨機數(shù)字表）

　　例2．將15只動物隨機分成三組。

　　(1)將動物編號如1、2……15號，然后在隨機數(shù)字表內(nèi)從某行某列起向某方向讀取15個隨機數(shù)字，取兩位隨機數(shù)字，依次抄錄于動物編號下。

　　(2)將隨機數(shù)字從小到大順序排列后得序號R。

　　(3)規(guī)定R=1～5者為A組，R=6～10者為B組，R=11～15者為C組。

　　(4)本例從隨機數(shù)字表第5行第17、18列起向下讀取15個隨機數(shù)字(表4-2)。

　　表4-2  15只動物完全隨機分三組結(jié)果

　　注：隨機數(shù)字06之后隨機數(shù)字為02，但前面已經(jīng)出現(xiàn)過，故舍去。

　　隨機分組應(yīng)注意：

　　(1)隨機數(shù)的位數(shù)不應(yīng)小于N的位數(shù)：

　　(2)隨機數(shù)如果有重號數(shù)字應(yīng)舍棄：

　　(3)若科研上需要各組例數(shù)不等可利用序號(R)調(diào)整各組例數(shù)。如在例2中要求A組6例，B組5例，C組4例，可規(guī)定R=1～6者為A組，R=7～11者為B組，R＝12～15者為C組。

　　統(tǒng)計假設(shè)檢驗方法：

　　(1)計量資料：t檢驗、方差分析或秩和檢驗等；

　　(2)計數(shù)資料：卡方檢驗等。

　　完全隨機設(shè)計的優(yōu)缺點：設(shè)計及統(tǒng)計分析簡單。但是，實驗效率不高，只能分析單因素。

　　2．配對實驗設(shè)計

　　將受試對象按某些特征或條件配成對子，然后分別把每對中的兩個受試對象隨機分配到實驗組和對照組，再給予每對中的個體以不同處理，連續(xù)實驗若干對，觀察對子間的差別有無意義。

　　配對設(shè)計的特征或條件：

　　動物實驗常以種屬、品系、性別相同，年齡、體重相近的兩只動物配成對子；臨床療效觀察常將病種、病型、族別、性別相同，年齡相差不超過2～3歲，生活習(xí)慣、工作環(huán)境等相似的患者配成對子；進行配對設(shè)計時應(yīng)注意不要“配對過頭”。例如，研究高血壓與鈉鹽攝入量的關(guān)系，如果將高血壓患者與非高血壓患者按飲食習(xí)慣配對后比較鈉鹽攝入量，由于飲食習(xí)慣與鈉鹽攝入量關(guān)系密切，可能會掩蓋病例與對照在鈉鹽攝入量上的差異；實驗者必須在整個研究過程中，始終能辨認(rèn)屬于同一對子的是哪兩只動物，因此動物編號是非常重要的；記錄實驗數(shù)據(jù)應(yīng)保持每對的一一對應(yīng)關(guān)系，不能錯亂或缺失。計算每對實驗數(shù)據(jù)的差值時，順序應(yīng)當(dāng)一致。

　　例：取20只小鼠，按性別、體重、窩別配成10對，試將其分配到實驗組與對照組中去。

　　先按配對條件配對，并將對子編號，如1.1、1.2、2.1、2.2……10.1、10.2，然后再在隨機數(shù)字表上任意指定行列及查找方向，將隨機數(shù)字依次抄寫在“對子號”下。

　　事先規(guī)定，遇單數(shù)定為AB順序，遇雙數(shù)定為BA順序。

　　本例：從隨機數(shù)字表中第46行31、32列向右查找隨機數(shù)字(表4～3)

　　表4-3  20只動物完全隨機分三組結(jié)果

　　常用統(tǒng)計假設(shè)檢驗方法

　　計量資料：配對t檢驗、配對符號檢驗、wilcoxon符號秩檢驗。

　　計數(shù)資料：卡方檢驗、一致性檢驗等。

　　配對實驗設(shè)計的優(yōu)點：配對設(shè)計可做到嚴(yán)格控制非處理因素對實驗結(jié)果的影響，同時使受試對象間的均衡性增大，因而可提高實驗效率。它與成組的完全隨機設(shè)計相比較，可克服受試對象間由于遺傳因素的差異所引起的偏差，同時還可以減少樣本含量。

　　3．交叉實驗設(shè)計(以藥理實驗為例)

　　是在自身配對設(shè)計基礎(chǔ)上發(fā)展的雙因素設(shè)計，可在同一對象身上觀察兩種處理的效應(yīng)，并能減少誤差，提高檢驗效率。

　　例如：研究A藥治療高血壓的療效，以傳統(tǒng)的抗高血壓B藥物作對照。經(jīng)隨機化將實驗動物分為兩組，一組先給A藥后再給B藥，另一組先給B藥后再給A藥。第一、二階段均為一個月，一、二階段之間的間歇期為一周。結(jié)果見表4-4：

　　表4-4  兩種藥物治療高血壓的交叉實驗

　　4．析因?qū)嶒炘O(shè)計(factorial design)

　　析因設(shè)計是一種多因素多水平交叉分組進行全面實驗的設(shè)計方法，將兩個或多個實驗因素的各水平進行實驗。

　　例如：2個因素同時進行實驗，每個因素取2個水平，實驗的總組合數(shù)有22=4個(表4-5)；如果每個因素取3個水平，則總組合數(shù)有32=9個，即這9種組合都要進行實驗，故一般采用簡單的析因?qū)嶒炘O(shè)計。

　　析因設(shè)計可以提供三方面的重要信息：各因素不同水平的效應(yīng)大�。桓饕蛩亻g的

　　表4-5 2×2析因設(shè)計

　　交互作用；通過比較各種組合，找出最佳組合。如果在一次實驗中，當(dāng)一個因素的水平間的效應(yīng)隨其他因素的水平不同而變化時，因素間存在交互作用，它是各因素效應(yīng)間不獨立的表現(xiàn)。

　　5．正交實驗設(shè)計

　　正交設(shè)計適用于多因素分析，可算出各因素不同水平對實驗的影響，找出最佳組合。現(xiàn)以L4(23)及L9(34)正交設(shè)計結(jié)合例子簡單介紹(L表示正交設(shè)計，4或9表示分4組或9組，23表示3個因素2個水平，34表示4個因素3個水平)。

　　例1  營養(yǎng)液中有三個因素(Ca2+，K+，Mg2+)，各有2個水平(高濃度、低濃度)，要分析它們對實驗的影響，找出最佳組合，可設(shè)計如下表4-6：

　　表4-6 L4(23)正交設(shè)計

　　表中Ca2+的1水平之和為8.6+6.2=14.8，K+的1水平之和為8.6+9.7=18.3…�？梢钥闯觯珻a2+的差值絕對值最大，說明Ca2+對實驗影響最大，且低濃度好。K+的影響次之，高濃度好。Mg2+的影響最小，高濃度好。結(jié)論是以低Ca2+，高K+，高Mg2+為最佳組合。但是，這一組合在實驗中并未出現(xiàn)，但正交設(shè)計提示這是最佳組合，可安排復(fù)試加以驗證。

　　例2  四種藥物各有三個水平，用L9(34)正交設(shè)計，見表4-7：

　　由表中可以看出甲藥影響最大，應(yīng)列為主藥，大劑量較好。乙、丙、丁三藥影響較小，可列為輔藥，最佳組合為甲藥大劑量，乙藥大劑量，丙藥小劑量，不用丁藥。按理四種藥物各三個水平，應(yīng)做34=81組實驗，現(xiàn)在只做9組就找出了實驗中并未出現(xiàn)的最佳組合。

　　三、預(yù)試驗及篩選

　　1．預(yù)試驗

　　在正式實驗前應(yīng)充分重視預(yù)試驗的重要性，小規(guī)模的預(yù)試驗是使用少量的動物得到預(yù)示性的數(shù)據(jù)或通過預(yù)試驗將操作和技術(shù)固定并完善，即通過預(yù)試驗可了解各因素對實驗的影響，找出最適實驗對象、用藥劑量和實驗條件及檢測指標(biāo)，如溫度、刺激強度、營養(yǎng)液組方等，為正式實驗做必要的準(zhǔn)備，提高實驗的重復(fù)穩(wěn)定性和靈敏度。為此，預(yù)試驗中應(yīng)注意以下問題：

　　表4-7  L9(34)正交設(shè)計

　　(1)實驗穩(wěn)定性：變異系數(shù)越小，說明實驗波動越小，實驗的重復(fù)穩(wěn)定性越好。變異系數(shù)CV=。

　　(2)實驗靈敏度：預(yù)試驗時測定兩個有效量(D1、D2)，測定其反應(yīng)強度(E1、E2)。

　　計算因變系數(shù)，因變系數(shù)越小，實驗靈敏度越好。因變系數(shù)CI=(E2-E1)／(lgD2-lgD1)。

　　2．篩選

　　篩選是在預(yù)試驗或既往經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，用少量動物對多種藥物或造模手段進行實驗。一般以P<0.1作為篩選合格的標(biāo)準(zhǔn)，以免漏篩有價值的藥物。常見篩選實驗有以下幾種。

　　(1)保護性實驗(以急性毒性實驗為例)：篩選解毒藥時，常將各解毒藥與毒劑的半數(shù)致死量(LD50)合用，連用4只非純品系動物，如無死亡，表明該藥篩選合格(P<0.1)；如有一只動物死亡時，可增加3只動物再試，如3只不死，也為篩選合格。總之，當(dāng)死亡率為0／4、1／7、2／9、3／12、4／14時均可認(rèn)為篩選合格。當(dāng)然，篩選合格表示值得進行正式實驗，不一定正式實驗必定有良好結(jié)果。

　　(2)概率判別實驗：本法應(yīng)用范圍更廣，對幾只動物用藥檢測其陽性反應(yīng)數(shù)，就可根據(jù)概率論推算出該藥陽性率的大致情況，參見表4-8。

　　表4-8  概率判別實驗（P<0.1）

　　一、LD50值測定

　　1．要求和注意事項

　　(1)動物：多用非純品系動物(能反應(yīng)個體差異)，如小鼠，健康雌雄各半，20±2g為宜，日齡達(dá)到性成熟。

　　(2)實驗條件：在有控制的室溫、光照、飼養(yǎng)和衛(wèi)生條件下進行。

　　(3)藥物及給藥途徑：以靜脈注射、腹腔注射和灌胃為主，最好和臨床上給藥途徑相同。小鼠的用藥量標(biāo)準(zhǔn)為：灌胃給藥應(yīng)小于1ml；靜脈注射應(yīng)小于0.2ml；腹腔注射應(yīng)小于1ml。另外，藥液pH值及滲透壓應(yīng)在生理范圍內(nèi)。

　　(4)觀察項目和時間：記錄毒性反應(yīng)的癥狀、原因以及致死時間、致死藥量、致死動物數(shù)量等，當(dāng)發(fā)現(xiàn)組織病變時，應(yīng)取材做病理切片，必要時做組織學(xué)檢查，整個實驗觀察7d。

　　(5)實驗報告：必須說明實驗條件，制定LD50值為全面表達(dá)實驗結(jié)果，應(yīng)求出

　　95％可信區(qū)間和LD10來表示誤差限度和量效關(guān)系，通過LD50和LD10算出LD5、LD95以

　　及回歸系數(shù)。

　　(6)LD50測定法：方法很多，有加權(quán)機率單位法(Bliss法)、目測機率單位法、目測圖解法、寇氏法(Korlbor)等，對短期內(nèi)致死藥物還可采用序貫法。

　　(7)對于中毒表現(xiàn)和致死原因的分析應(yīng)給予充分重視。

　　2．LD50值測定步驟

　　(1)預(yù)試驗：根據(jù)經(jīng)驗或文獻(xiàn)找出實驗動物0和100％死亡的劑量，即上下限劑量(Dn、Dm)。對于無毒性參考資料的藥物，一般先配制最大濃度藥劑，然后倍比稀釋成多個劑量，方法是每組取4只小鼠，按估計劑量梯度依次給藥。如某組死亡數(shù)為4／4，其前一組為2／4或3／4則以該組劑量定為Dm，如前一組是0／4或1／4，則以該組劑量的1.5倍定為Dm，同法找出Dn，這樣找出的Dm，Dn比較可靠，為正式實驗提供依據(jù)。

　　(2)分組：以4～9組為宜，各組給藥劑量按等比關(guān)系排列。

　　(3)根據(jù)實驗結(jié)果計算LD50：

　　LD50的95％平均可信限LD50±1.4×(LD84一LD16)／

　　其中N' 為5％～95％致死率間動物數(shù)。

　　二、慢性毒性實驗

　　1．動物選擇

　　至少采用兩種不同種屬的實驗動物，即嚙齒類動物(大鼠、小鼠等)和哺乳類動物(犬、猴等)。一般常采用大鼠和犬兩種，雌雄各半，且動物數(shù)量不宜太少，要滿足統(tǒng)計學(xué)處理的要求。動物的進化程度越高，對藥物的敏感性越強，慢性毒性實驗的周期較長，所以要盡量選用年齡較小的實驗動物，而且選用未成年的實驗動物在迅速生長時期，可以發(fā)現(xiàn)藥物對生長及各組織器官成熟的影響。

　　慢性毒性實驗開始選擇的小鼠年齡最好是2～3周，體重8～10g，而大鼠不超過3周，體重50～60g。但是避孕藥物的毒性實驗則要求必須使用性成熟動物，如小鼠應(yīng)60日齡以上，大鼠應(yīng)在120日齡以上。

　　2．劑量選擇

　　常用三個劑量組，大動物可用兩個劑量組，并嚴(yán)格按要求設(shè)動物對照組。高劑量組(LD50的1／10～1／4劑量)應(yīng)有輕微可見的毒性反應(yīng)(或者某些化驗指標(biāo)有明確而輕微的變化)。中劑量組按LD50的1／30～1／10定量，最低劑量組應(yīng)是閾劑量組或是無作用劑量組，具體劑量依據(jù)實驗?zāi)康亩�定�?/p>

　　3．給藥途徑

　　最好選擇臨床試用的給藥途徑。

　　4．給藥期限

　　最好是臨床試用的用藥時間(連續(xù)給藥)的3～4倍，臨床用藥30d以上者，動物給藥至少半年。

　　5．觀察指標(biāo)

　　包括體征、常規(guī)血、尿檢查、臟器解剖及肉眼觀察、生化指標(biāo)檢查等(如新藥則按其國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)核查應(yīng)有項目)。做病理切片進行組織學(xué)檢查(二十幾個臟器)，必要時行骨髓檢查、酸堿平衡、水和電解質(zhì)代謝等。

　　由于在慢性毒性實驗中，受試藥物的給藥劑量較低，往往一些觀察指標(biāo)變化程度較小，因此需注意：在給藥前要觀察并記錄預(yù)計的觀察指標(biāo)，以利于給藥后的比較；在給藥期間進行定期指標(biāo)觀察時，對照組需同步觀察；實驗結(jié)束后，主張將最高劑量組與對照組各留部分動物繼續(xù)飼養(yǎng)1～2個月，以便對已出現(xiàn)變化的指標(biāo)進行追蹤觀察，有助于探討受試藥物對實驗動物有無后續(xù)作用，以及損傷可否恢復(fù)。

　　6．結(jié)果定論

　　按觀察記錄的結(jié)果定論，但不應(yīng)忽視綜合因素及其他因素對結(jié)果的影響。

　　三、致癌實驗

　　1．動物選擇

　　其選擇動物最重要的依據(jù)是對誘發(fā)腫瘤的易感性，所以應(yīng)考慮物種、品系、年齡和性別。物種的選擇對受試物有特定的靶器官時尤為重要。同時還應(yīng)考慮選擇腫瘤自發(fā)率低、抗病力強且易管理的實驗動物，一般多選用大、小鼠，雌雄各半，100只以上做一組，動物多為近交系的第一代雜交動物。

　　2．劑量選擇

　　此點較難，但非常重要，一般使用三個劑量，其中最高劑量應(yīng)為最大耐受量，理想的最大耐受量不應(yīng)致死，也不引起可能縮短壽命的毒性表現(xiàn)和病理改變，并且與對照組相比的體重下降不大于10％，中劑量為高劑量的1／4～1／3，低劑量最好相當(dāng)于或低于人類實際可能接觸的劑量，同時應(yīng)設(shè)計好陰性對照組和陽性對照組。

　　3．觀察指標(biāo)

　　體征，一般癥狀，定期稱體重，最主要是密切觀察有無腫瘤發(fā)生，如生長有腫瘤，則需要做病理組織切片或電鏡觀察其病理學(xué)變化。

　　4．結(jié)果定論

　　一般以組織學(xué)結(jié)果判定。

　　四、其他簡單實驗

　　1．局部刺激性實驗

　　(1)動物選擇：最好選用與人類皮膚、黏膜反應(yīng)比較相近的動物，如家兔、豚鼠和小型豬等。動物種屬依據(jù)要觀察的指標(biāo)和模型的合理性進行選擇，通常一個實驗類型選擇一種實驗動物進行評價。刺激性實驗結(jié)果從動物外推到人的可靠性有限，如果用兩種動物進行試驗得到類似的結(jié)果，則會增加從動物外推到人的可靠性。

　　(2)劑量選擇：可選擇幾種不同濃度的制劑進行實驗，其中包括擬用于臨床研究的濃度，為臨床研究的安全性提供選擇依據(jù)�？梢酝ㄟ^改變給藥頻次進行劑量的調(diào)整。對于局部用膏狀制劑，在給藥面積不變的情況下，不應(yīng)通過增加厚度來滿足增加給藥劑量的目的。

　　(3)給藥途徑：一般應(yīng)與臨床給藥途徑一致，否則應(yīng)加以說明。

　　(4)給藥部位：一般應(yīng)選擇與臨床應(yīng)用相似的部位。并注意對可能接觸到受試物的周圍組織的影響。設(shè)計劑量和給藥頻次時，應(yīng)考慮受試動物給藥部位的解剖和生理特點，保證受試物在給藥部位的有效暴露時間。

　　(5)觀察指標(biāo)：首先要進行肉眼觀察，詳細(xì)描述動物局部反應(yīng)，包括紅斑、水腫、充血程度及范圍，并以計分的方式表示，同時觀察動物的一般狀態(tài)、行為、體征等；其次進行組織病理學(xué)檢查，應(yīng)詳細(xì)描述給藥部位的病理變化，并進行半定量分析、判斷，提供相應(yīng)的組織病理學(xué)照片；最后進行可逆性觀察，若出現(xiàn)刺激性反應(yīng)，應(yīng)進行停藥后的恢復(fù)期觀察，以明確毒性反應(yīng)的恢復(fù)情況。

　　2．過敏性實驗

　　通常選用體重300～400g的豚鼠，并需要仔細(xì)觀察過敏反應(yīng)的一系列指標(biāo)。

　　3．異常毒性實驗

　　最好選用同一品種小鼠(純品系)，體重17～20g，雌性無孕，健康無傷。

　　4．熱原檢查

　　目前常選用家兔為本實驗動物。在熱原實驗開始之前進行家兔的體溫監(jiān)測，只有在監(jiān)測的4h內(nèi)，家兔的體溫差異不超過0.4℃的即可被用來進行熱原實驗，而且在給約之前的30min內(nèi)體溫差不超過0.2℃的家兔方可給藥。其給藥途徑為耳緣靜脈注射。在給藥后4h內(nèi)需要密切監(jiān)測實驗用家兔的體溫變化。

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